MACS (MAGNETIC-ACTIVATED CELL SORTING) -METÓDA SELEKCIE SPERMIÍ.

‍

(MACS) je efektívny spôsob výberu funkčných spermií a zvýšenie miery tehotenstva.

‍

MACS® ART Annexin V System bol navrhnutý pre selektívne odstránenie defektných, aj keď morfologicky nerozlíšiteľných buniek zo vzorku pacienta. Proces začína magnetickým označením poškodených spermií, ktoré následne prechádzajú separačnou kolónou, kde sú selektívne zachytávané. Intaktné žijúce spermie, ktoré nevykazujú známky fragmentovej DNA, pretečú kolónou a sú zbierané pre ďalšie použitie (ICSI alebo kryokonzervácia).

‍

Priamy zisk spermií pripravených pre fertilizáciu predstavuje kľúčovú výhodu oproti tradičným DNA fragmentačním testom, pri ktorých pacient získa len nepraktickú informáciu o percente poškodených buniek.

IVM – in vitro maturácia oocytov

‍

Predstavuje odber nezrelých oocytov z nestimulovaných resp. minimálne stimulovaných vaječníkov. Dozrievanie oocytu a získanie jeho schopnosti oplodnenia sa dosahuje v laboratórnych podmienkach.

Indikácie:

‍

• u pacientok, kde klasickou stimuláciou nie je možné získať zrelé oocyty
• u pacientok s vysokým rizikom hyperstimulačného syndrómu
• u pacientok s polycystickými ováriami (PCOS)
• u pacientok s veľmi diferencovaným rastom folikulov v rámci jednej stimulácie
• u pacientok po ovariálnej chirurgii

ME – Monitoring embryí

‍

Neinvazívny kontinuálny monitoring embryí je metóda v kultivácii embryí in vitro, ktorá umožňuje sledovať vývoj embryí bez nutnosti kontrolovať ich vývoj pod mikroskopom mimo inkubátora. Umožňuje ich nepretržité sledovanie na monitore. Selekcia najvhodnejšieho embrya na transfer je efektívnejšia a tým zvyšuje šancu na úspešné tehotenstvo.

‍

Hlavné výhody ME sú:

• minimalizácia manipulácie s embryami, čo znižuje riziko ich poškodenia
• neustály prehľad o stave všetkých embryí
• presná regulácia CO₂, O₂ a kontrola teploty počas kultivácie embryí
• presná dokumentácia stavu embryí

‍

Táto pomerne nová metóda zavedená v asistovanej reprodukcii prináša dokonalejší výber embryí vhodných k prenosu do maternice a zvyšuje percento otehotnení po liečbe. Na permanentný monitoring embryí využívame prístroj EmbryoScope.

Kultivácia embryí v laboratórnych podmienkach býva najčastejšie 2 až 5 dní odo dňa punkcie vaječníkov.

‍

Pri väčšom počte embryí je pre výber morfologicky najlepšie sa vyvíjajúce embryo štandardná päťdenná kultivácia, ktorá umožňuje kontrolu a následnú selekciu najvhodnejších embryí na transfer (= prenos do maternice).

‍

Pokiaľ je počet embryí nízky (2 – 3 embryá) a tie už vykazujú rozdielny vývoj na začiatku kultivácie, je možné preniesť embryá do maternice druhý alebo tretí deň kultivácie.

Embryotransfer – prenos embryí do maternice je pre pacientku nenáročný bezbolestný výkon podobný bežnému gynekologickému vyšetreniu. Embryá sú zavedené do dutiny maternice tenkým transferovým katétrom.

KET alebo transfer rozmrazených embryí prebieha rovnako ako embryotransfer. Príprava pacientky na KET spočíva v hormonálnej stimulácii sliznice maternice, kontrolovanej ultrazvukom. Embryá sú rozmrazené, zhodnotí sa ich kvalita a po krátkodobej kultivácii sú tenkým transferovým katétrom vkladané do dutiny maternice.

AZH – asistovaný zonálny hatching

‍

Mikromanipulačná technika, pri ktorej sa na malom mieste naruší obal (zóna pellucida) embrya. Pre uhniezdenie embrya v sliznici maternice je nutné vycestovanie embrya zo zóny pellucidy, ktorou je po celý čas kultivácie chránené. V niektorých prípadoch môže dôjsť k zlyhaniu implantácie embrya z dôvodu príliš tvrdej zóny pellucidy. Pomocou laserového lúču dôjde k šetrnému narušeniu obalu a uvoľneniu cesty pre embryo. Pri AZH nie je možné embryo poškodiť.

EmbryoGlue® je médium používané na prenos embryí do maternice, ktoré obsahuje okrem všetkých dôležitých živín, potrebných pre optimálny vývoj embryí, aj látku zvanú hyaluronan vo vyššej koncentrácii. Hyaluronan sa prirodzene vyskytuje vo vyššej koncentrácii vo folikulárnej tekutine ako aj v tekutine vo vajíčkovodoch a v maternici, kde vytvára prostredie so zvýšenou viskozitou. Nezávislý výskum preukázal vyššie šance na otehotnenie, ak sa použije pri prenose embryí do maternice kultivačné médium EmbryoGlue® v porovnaní s médiom s nízkou koncentráciou resp. bez obsahu hyaluronanu. EmbryoGlue® je použiteľné pri prenose embryí všetkých vývojových štádií od dvojdňových embryí až po blastocystu nezávisle na tom, či ide o prenos čerstvých alebo mrazených embryí.

PGS – preimplantačný genetický screening

‍

PGS je hľadanie akejkoľvek zmeny v genetickej výbave embrya. S využitím danej metódy kontrolujeme celú DNA po jej veľkých úsekoch. Pri PGS sa využíva technika Fluorescenčnej in situ hybridizácie (FISH), ktorá umožňuje analyzovať obmedzený počet chromozómov 5 resp. 8, najčastejšie tých, ktorých odchýlky v počte vedú k samovoľnému potratu alebo k narodeniu dieťaťa s vážnym genetickým postihnutím (napríklad Downov, Patauov a Edwardsov syndróm). Metóda FISH je vo veľkej miere nahrádzaná metódou array CGH (tzv. mikročipy), vďaka ktorej je možná analýza všetkých chromozómov pričom k samotnému oplodneniu prichádza prirodzene (tzn. dochádza k samovoľnému splynutiu spermie a vajíčka).

‍

‍Indikácie:

• vek pacientky nad 37 rokov
• opakované neúspešné IVF cykly
• opakované spontánne aborty
• partner s ťažkou poruchou spermiogramu
• predchádzajúca onkologická liečba u jedného z partnerov

‍

PGD – preimpantačná genetická diagnostika

‍

V prípade PGD ide o hľadenie konkrétnej genetickej zmeny. To znamená je určená rodičom, ktorí sú nositeľmi prestavby genetického materiálu medzi chromozómami (translokácie, delécie, a pod.). Táto technika umožňuje výber embrya, ktoré danú prestavbu nenesie.

‍

Preimplantačná genetická diagnostika monogénových ochorení

‍

Genetické vyšetrenie embryí, ktoré je určené pre páry, ktoré majú známu genetickú odchýlku a zvýšené riziko narodenia dieťaťa s genetickou záťažou. Predpokladom využitia tejto metódy je to, že ochorenie je testovateľné na génovej úrovni, inak povedané musí byť v rodine známa špecifická zmena génu (mutácia), ktorá je za ochorenie zodpovedná (cystická fibróza, spinálna muskulárna atrofia, Duchennova svalová dystrofia, Huntingtonova choroba).